Sequência do divertido Uma Noite no Museu (2006), liderada pelo mesmo time: o diretor Shawn Levy (Doze É demais) e os roteiristas Robert Ben Garant e Thomas Lennon - criadores das personagens do primeiro -, aqui vividos em sua maioria pelo mesmo elenco, encabeçado pelo consagrado comediante Ben Stiller.

Ele é Larry Daley, vigia noturno do Museu de História Natural de Nova York, onde as figuras de cera ganham vida todas as noites. Como o Museu será fechado para reformas e melhoramentos, o acervo deve ser todo transferido para o Smithsonian Institution, em Washington.

A Fundação Smithsonian possui um complexo de museus e o maior acervo do mundo, reunindo mais de 136 milhões de itens em suas coleções, entre eles o avião em que a pioneira Amelia Earhart fez o primeiro vôo sem escalas sobre o oceano Atlântico.

Com a ideia de continuar cuidando e usufruindo da companhia de seus amigos, Larry envia o seu currículo para o Museu de Washington e consegue o emprego de zelador.

Lá ele terá de enfrentar Kah Mun Rah, um cruel faraó do antigo Egito, que ganha vida graças a um comprimido mágico. Com um acervo maior, os amigos de Larry, como Dexter, Jedediah Smith, Theodore Roosevelt e os neandertais, entram em conflito com os personagens históricos do novo Museu, como o General Custer, Al Capone e seus gangsters, Napoleão Bonaparte, Octavius, Ivan o Terrível, e outros.


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